二氫楊梅素（dihydromyricetin，DMY），又名蛇葡 萄素，是一種二氫黃酮醇類化合物，DMY 活性比較 廣泛，安全性好，具有抗癌、抗氧化、抗炎、保肝、鎮(zhèn)咳 祛痰等藥理作用。鹽酸伊立替康（Irinotecan，CPT-11）是一種水溶 性的抗腫瘤藥物，1998 年歐洲和美國 FDA 批準(zhǔn)將 CPT-11 聯(lián)合 5- 氟尿嘧啶（5-FU）/ 醛氫葉酸（LV）方 案作為轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的一線診治的方案。

鹽酸伊立替康標(biāo)準(zhǔn)品（CAS 編號(hào)：136572-09-3， 上海奈啟生物科技有限公司）；二氫楊梅素標(biāo)準(zhǔn)品 （CAS 編號(hào)：27200-12-0，上海奈啟生物科技有限公 司）；鹽酸伊立替康（含量≥98%，批號(hào)：DA056-2- 151103，上海創(chuàng)諾制藥有限公司）；二氫楊梅素（含 量≥98%，批號(hào)：D16071901，南京狄爾格醫(yī)藥科技有 限公司）；卵磷脂（名稱：S100，上海利寶德生物科技 有限公司）；膽固醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）； Sephadex G-50 （Medium，Biotopped 公司）；透析袋 （MW:8000-14400，美國 Sigma 公司）；甲醇（色譜純， DIKMA 公司）；乙腈（色譜純，DIKMA 公司）；其他試劑均為分析純。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申勝生物技術(shù)有限公司）；UV 9100 紫外可見分光光度計(jì) (北京萊伯泰科儀器有限公司)； 納米粒度及Zeta電位分析儀(Zetasizer Nano-ZS90，馬爾文儀器有限公司)；離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；超聲波細(xì)胞破碎機(jī)(寧波新芝生物 科技股份有限公司，Scientz－IID)；數(shù)顯恒溫磁力攪 拌器（金壇市榮華儀器制造有限公司）；數(shù)控恒溫水浴鍋 （上海申勝生物技術(shù)有限公司）；pH 計(jì) （DELTA320，梅特勒 - 托利多儀器上海有限公司）； 分析天平（SartoriusBT25S,德國 Sartorius）；玻璃層析 柱（哈爾濱市醫(yī)用玻璃廠）；電子天平（Sartorius 公 司，德國）;真空干燥箱（DZ-3BCⅡ）；渦旋混合儀（其林貝爾儀器制造公司）；離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器 廠）。

用 甲 醇 配 制 CPT-11、 DMY 和輔料（空白脂質(zhì)體）等溶液，使用紫外分光 光度計(jì)在 190~600nm 處進(jìn)行波長掃描，掃描結(jié)果見圖1。

由圖 1 可知，CPT-11 最大吸收波長在 370nm 處；DMY 在 291nm 處有最大吸收波長，輔料不干擾 2 種主藥含量的測(cè)定。因此選擇 370nm 為 CPT-11 的測(cè)定波長，291nm 為 DMY 的測(cè)定波長。 2.1.2 CPT-11 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 稱取 CPT-11 標(biāo) 準(zhǔn)品 2.5mg，放于 25mL 容量瓶中，加甲醇溶解制得 濃度為 100μg·mL-1 的溶液。吸取 0.1、0.5、1.0、1.5、 2.0、2.5、3.0、4.0、5.0mL 置于 10mL 容量瓶，得到一系列濃度梯度，以甲醇為空白對(duì)照，在 370nm 下測(cè)定 溶液吸光度，吸收度 A 對(duì) CPT-11 濃度 C 線型回歸， 其 回 歸 方 程 為 ：Y=0.0273X+0.0009（R2 =0.9997）， CPT-11 在 1.0~50μg·mL-1 內(nèi)線性良好。DMY 回收率實(shí)驗(yàn)：量取 0.5mL 空白脂質(zhì)體溶 液，分別滴加 5、20、30μg·mL-1 的 3 個(gè)濃度的 DMY 對(duì)照品溶液，加入適量的甲醇破乳，按 2.1.3 項(xiàng)下測(cè) 定含量，計(jì)算其回收率。結(jié)果表明，CPT-11 與 DMY 的低、中、高 3 種濃 度的平均回收率都在 99%-100.06%之間，RSD 都小 于 2%，滿足方法學(xué)要求。分 別 吸 取 100μg·mL-1 的 CPT-11 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 0.3，0.2，0.1mL 上柱，進(jìn)行洗脫，收集游離藥物洗脫液，測(cè)定樣品 CPT-11 吸光度，根據(jù) CPT-11 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含量 和柱回收率。同樣的方法對(duì) DMY 藥物進(jìn)行洗脫，測(cè) 定樣品 DMY 吸光度，根據(jù) DMY 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含 量和柱回收率。

脂質(zhì)體包封率是重要的評(píng)價(jià)指標(biāo)，本文曾嘗試 采用超速離心法，根據(jù)游離藥物與復(fù)方脂質(zhì)體之間 的重力差別，通過高速離心進(jìn)行分離，但在取出過程中容易產(chǎn)生晃動(dòng)而造成離心不完全，重現(xiàn)性較差。本 文選用 Sephadex G-50 色譜柱將復(fù)方脂質(zhì)體與游離 藥物分離開，根據(jù)分子粒徑的差異，在柱上的停留時(shí) 間不同，達(dá)到目的。柱回收率結(jié)果表明，葡聚糖凝膠 Sephadex G-50 對(duì) DMY 和 CPT-11 的吸附力很小， 柱回收率較高，可以完全被洗脫下來。通過實(shí)驗(yàn)，本文對(duì)以下幾種制備方法進(jìn)行篩選： 薄膜超聲分散法、乙醇注入法、逆向蒸發(fā)法、硫酸銨 梯度法以及乙醇注入法結(jié)合硫酸銨梯度法。分別采 用上述方法制備復(fù)方脂質(zhì)體，根據(jù)復(fù)方脂質(zhì)體的外 觀形態(tài)、包封率、載藥量及粒徑大小，選用乙醇注入 法結(jié)合硫酸銨梯度法制備復(fù)方脂質(zhì)體。

建立了 CPT-11-DMY 復(fù)方脂質(zhì)體中藥物含量 的紫外分光光度檢測(cè)方法，方法簡便可靠，同時(shí)建立 了復(fù)方 脂 質(zhì) 體 的 包 封 率 的 檢 測(cè) 方 法 為 Sephadex G-50 色譜柱層析法，該方法結(jié)果準(zhǔn)確，過程簡單易 操作且方法的重現(xiàn)性好。以乙醇注入法結(jié)合硫酸銨 梯度法構(gòu)建復(fù)方脂質(zhì)體，根據(jù) L（9 34 ）正交試驗(yàn)確定 優(yōu) 化 處 方 ， 復(fù) 方 脂 質(zhì) 體 中 CPT-11 的 包 封 率 為 82.58%、DMY 的包封率 71.45%，粒徑為 （123.1± 1.8）nm，PDI 為 0.181，大小均勻，呈正態(tài)分布，Zeta 電位為 -24.3mV。透射電鏡下觀察復(fù)方脂質(zhì)體均為 類球型，分散性良好。通過動(dòng)態(tài)透析法建立復(fù)方脂質(zhì) 體的體外釋放動(dòng)力學(xué)方法，選用 PBS-2%Tween-80 溶液為透析介質(zhì)，復(fù)方脂質(zhì)體在體外釋藥過程中都 符合藥典要求即：2h 釋放不超過 30%且 48h 釋放超 過 50%。說明復(fù)方脂質(zhì)體具有緩釋的作用。



 

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