0 引言

膝骨關(guān)節(jié)炎是常見于中老年人群的一種以退行性改變 為主的常見病、多發(fā)病，一般認(rèn)為屬于中醫(yī)學(xué)“骨痹”類， 其發(fā)病原因目前尚未完全闡明。有研究顯示膝骨關(guān)節(jié)炎的 發(fā)病與高齡、女性、體質(zhì)量指數(shù)、關(guān)節(jié)外傷、關(guān)節(jié)過度使 用、骨密度、肌力等因素高度相關(guān)。中國目前已進(jìn)入老 齡化社會，膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎作為中老年人的常見病，其 發(fā)病率也較高。上海有學(xué)者通過調(diào)查1 499名對象研究得出 結(jié)論，年齡≥40歲者膝骨關(guān)節(jié)炎患病率為33.3%。腎臟陰 陽兩虛、外感寒濕、肝氣虛、陰虛、氣虛、陽虛、瘀血是 “骨痹”最常見的病機(jī)因子。

1 材料和方法

1.1 設(shè)計(jì)

隨機(jī)對照動物實(shí)驗(yàn)。

1.2 時(shí)間及地點(diǎn)

于2014年2至4月在黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 實(shí)驗(yàn)動物中心進(jìn)行實(shí)驗(yàn)并采集觀察指標(biāo)。

1.3 材料

1.3.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康4周齡雄性新西蘭大白兔50只，體 質(zhì)量(1.2±0.1) kg，平均1.2 kg，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn) 中心提供。實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(黑)2013-004， 實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK(黑)2013-012，實(shí)驗(yàn)過程中 對所有動物的處置依照《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動物的指導(dǎo)性意見》 中的相關(guān)規(guī)定。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)倫 理委員會批準(zhǔn)。

1.3.2 主要實(shí)驗(yàn)藥材、試劑及儀器

一次性獨(dú)立包裝漢章 針刀Ⅰ型4號φ0.25 mm×30 mm，(北京華夏針刀醫(yī)療器械 廠，藥(械)準(zhǔn)字：2011第2270164號)；丹參注射液，規(guī)格：10 mL/支(正大青春寶制藥，國藥準(zhǔn)字Z33020177)； utrao-SM 800全自動酶標(biāo)儀(上海永創(chuàng)醫(yī)療器械有限公 司)；石蠟切片機(jī)(U-641型，美國貝克曼公司)；光學(xué)顯微 鏡照相系統(tǒng)(BH-5型,日本Olympus公司)；數(shù)碼X光機(jī) (CEx86型，美國GE公司)；微型振蕩器MH-1型(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；小型高速離心機(jī)(Eppendorf 中國有限公司)；兔白細(xì)胞間介素ELISA試劑盒(欣博盛，貨 號RBE015)，兔腫瘤壞死因子ELISA試劑盒(欣博盛，貨號： RBE102a.48)；低糖型DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液(北京博奧森生物 技術(shù)公司)；40 g/L多聚甲醛(山東省壽光市旭東化工有限公 司，CAS號：30525-89-4)；滅菌注射用水(5 mL，石家莊 第四制藥有限公司) 。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)動物分組及造模

將50只健康新西蘭白兔隨機(jī) 分為5組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：空白對照組、模型組、單純丹參注射液 組、單純閉合針刀松解組(針刀組)、閉合針刀松解結(jié)合丹參 注射液組關(guān)節(jié)腔注射組(針刀聯(lián)合丹參注射液組)，每組各10 只。所有動物同等條件下飼養(yǎng)1周，穩(wěn)定后，除空白對照組 外其他4組兔均參考張子峰等報(bào)道的方法造模：將兔取左 側(cè)臥位，于右側(cè)髖關(guān)節(jié)大轉(zhuǎn)子后約1 cm處為中點(diǎn)，上下直切 口3 cm，分離髂內(nèi)靜脈屬支臀下靜脈，雙重結(jié)扎，結(jié)扎線 間切斷。仰臥位，右側(cè)腹股溝觸及動脈搏動處作1 cm縱形切 口，分別分離股靜脈、大隱靜脈，分別雙重結(jié)扎后于結(jié)扎線 間切斷。于右側(cè)膝關(guān)節(jié)間隙水平切斷腓腸肌內(nèi)、外側(cè)頭，切 除5 mm長一段跟腱。所有手術(shù)切口縫合皮下組織、皮膚后 敷蓋乙醇紗布、棉墊。造模后連續(xù)3 d注射青霉素5 U/(kg•d)、 鏈霉素10×104 U/(kg•d)，所有動物分籠飼養(yǎng)。造模后每日驅(qū) 趕動物活動2 h，共驅(qū)趕動物2周，2周后動物出現(xiàn)關(guān)節(jié)僵硬、 瘸行，關(guān)節(jié)周圍可觸及條索結(jié)節(jié)，X射線片顯示下肢力線 右外翻10°變?yōu)閮?nèi)翻，提示造模成功。

1.4.2 各組干預(yù)方法

(1)針刀組：成功建模后第2天開始干預(yù)，首先暴露實(shí) 驗(yàn)動物右側(cè)膝關(guān)節(jié)，觀察右側(cè)下肢是否出現(xiàn)腫脹、變形和 肌肉萎縮，對膝關(guān)節(jié)進(jìn)行按壓檢查。觸診點(diǎn)：內(nèi)外側(cè)支持 帶、內(nèi)外側(cè)膝眼；膝關(guān)節(jié)上方髕上囊、股四頭肌各肌肌腹； 膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)股薄肌肌腹及止點(diǎn)、收肌肌群肌腹及止點(diǎn)和脛 骨平臺附近。針刀松解每次選取上述部位病理性結(jié)節(jié)或條 索10個(gè)，常規(guī)消毒術(shù)，無麻醉。依照針刀操作流程先定點(diǎn)， 再定向，之后刺入靶點(diǎn)組織，以通透剝離手法加壓切割病 變組織。屈伸牽張膝關(guān)節(jié)，每只兔子每次給予10 min手法 松解牽張。每周1次，持續(xù)5周。
(2)空白對照組及模型組：給予兔關(guān)節(jié)腔注射生理鹽水 0.3 mL，每周1次，共5次。
(3)丹參注射液組：給予兔關(guān)節(jié)腔注射0.3 mL丹參注射 液，每周1次，共5次。
(4)針刀聯(lián)合丹參注射液組：每周進(jìn)行1次針刀治療， 具體干預(yù)方法及干預(yù)頻率同針刀組。每次針刀干預(yù)之后， 關(guān)節(jié)腔注0.3 mL丹參注射液。

1.4.3 兔膝關(guān)節(jié)軟骨大體觀察

干預(yù)結(jié)束后，麻醉下耳緣靜脈空氣栓塞處死動物。切開關(guān)節(jié)囊，暴露脛骨、股骨軟 骨面，大體觀察兔膝關(guān)節(jié)軟骨面情況。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)選用新西蘭白兔50只，分為 5組，實(shí)驗(yàn)過程無脫失，全部進(jìn)入結(jié)果分析。空白對照組膝關(guān)節(jié)軟骨無明顯 磨損, 周圍滑膜無明顯增生及炎性改變。模型組液組膝關(guān) 節(jié)磨損較為嚴(yán)重，軟骨破壞達(dá)到3級，但并未暴露軟骨下骨, 周圍滑膜增生及炎性改變較為明顯。針刀組、丹參注射液 組、針刀聯(lián)合丹參注射液組膝關(guān)節(jié)輕度磨損，1級到2級， 周圍滑膜增生及炎性改變不明顯，兩組在大體觀下無法辨 別磨損嚴(yán)重程度的差異。空白對照組 軟骨表明光滑、軟骨細(xì)胞梭形排列，形態(tài)、數(shù)目、結(jié)構(gòu)基 本正常，無血管翳生成；模型組表層軟骨細(xì)胞明顯減少， 細(xì)胞排列紊亂；針刀組軟骨表層較為光滑、軟骨細(xì)胞數(shù)目 結(jié)構(gòu)基本正常；丹參注射液組軟骨表層光滑、軟骨細(xì)胞排 列輕度紊亂，局部缺損；針刀聯(lián)合丹參注射液組軟骨表層 較為光滑，軟骨細(xì)胞數(shù)量結(jié)構(gòu)基本正常。見圖1。病理切片 評分，丹參注射液組評分略高于針刀組和針刀聯(lián)合丹參注 射液組，但此3組之間差異無顯著性意義。見表1。


3 討論

膝關(guān)節(jié)退行性骨關(guān)節(jié)炎是關(guān)節(jié)炎 中最常見的一種，也是造成膝關(guān)節(jié)疼痛、僵硬、功能喪失 的原因之一。隨著全球老齡化的不斷加重，國外有學(xué)者預(yù) 測到2030年，膝骨關(guān)節(jié)炎將成為人群中最主要的獨(dú)立致殘 原因，這將不僅影響個(gè)體的生活質(zhì)量，還將增加全球醫(yī) 療保障體系的負(fù)擔(dān)。傳統(tǒng)上，膝關(guān)節(jié)退行性骨關(guān)節(jié)炎的治 療包括語言治療、物理治療、康復(fù)、口服藥物和手術(shù)治療。 近十余年，隨著對再生醫(yī)學(xué)的研究加深，干細(xì)胞治療膝關(guān) 退行性骨關(guān)節(jié)炎也展現(xiàn)出很大的潛力。雖然膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié) 炎的治療方法很多，但脛骨高位截骨術(shù)、全膝關(guān)節(jié)置換等 治療方法針對退行性骨關(guān)節(jié)炎終末期的患者、且對于適應(yīng) 證和手術(shù)醫(yī)師有嚴(yán)格的要求。在國內(nèi)手術(shù)條件、患者 理念的影響下，可以行動的患者對開展手術(shù)的意愿并不 高。針刀手術(shù)及中藥關(guān)節(jié)腔注射，作為國內(nèi)獨(dú)有的治療 方法，有很好的群眾基礎(chǔ)。目前國內(nèi)每年舉辦針刀培訓(xùn)班 超過千次，參加針刀培訓(xùn)的醫(yī)師兩萬余人，接受針刀治療 的患者數(shù)量無法統(tǒng)計(jì)。據(jù)估計(jì)，針刀已在英國等30多個(gè)國 家開展，正在逐漸走出國門、服務(wù)世界。因而研究針刀 技術(shù)對關(guān)節(jié)炎的治療作用擁有很大的臨床價(jià)值。對于關(guān)節(jié) 腔注射來說，中藥注射為患者提供了關(guān)節(jié)腔注射透明質(zhì)酸 和激素之外的第3個(gè)選擇，已經(jīng)被證明臨床中有效且不存在關(guān)節(jié)腔注射激素的不良反應(yīng)。此次實(shí)驗(yàn)中，兩組療法結(jié) 合優(yōu)于單獨(dú)使用一種療法，因而關(guān)節(jié)腔注射和針刀療法相 結(jié)合，經(jīng)過不斷完善，將希望成為膝骨關(guān)節(jié)病序貫治療方 案的重要組成部分。