1 引 言

甲醛(HCHO), 又稱蟻醛, 在室溫下是一種無色、有刺 激氣味的氣體, 易揮發, 易溶于水、醇等溶劑。通常甲醛水 溶液(30%~40%)稱為福爾馬林, 是有刺激氣味的無色液體。 甲醛是一種破壞細胞蛋白質的毒性物質, 直接作用于氨基、 巰基和羧基, 生成次甲基衍生物, 從而破壞機體蛋白質和酶, 干擾細胞正常代謝, 起到殺菌和防腐的作用。長期接觸低 濃度甲醛, 可能會引起神經系統、免疫系統、呼吸系統和肝 臟的損傷, 出現頭昏、乏力、嗜睡、食欲減退、視力下降等 癥狀。

2 材料與方法

2.1 試劑與儀器

2.1.1 樣 品

竹筍、牛肚均購自南京本地超市、銀魚購買于蘇州太湖一家水產店, 經 SC/T 3025-2006《水產品中甲醛的測定》高效液相色譜法測試, 本底不含甲醛。

2.1.2 試 劑

氫氧化鉀、鹽酸、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、冰乙酸、乙二 胺四乙酸二鈉、高碘酸鉀、4-氨基-3-聯氨-5-巰基-1, 2, 4-三氮 雜茂(AHMT)、無水乙酸鈉、乙酰丙酮, (分析純, 國藥集團化 學試劑有限公司); 甲醛標準品溶液(濃度為 100 µg/mL, GSB07-3141-2014 104122, 環境保護部標準樣品研究所)。

2.1.3 儀器設備

TopPette 手動單道移液器(大龍興創實驗儀器(北京)有 限公司); 其林貝爾QL-866 渦旋混合器(其林貝爾儀器制造有限公司); BPI-B-4 電子天平(深圳市嘉英電子有限公司); TGL-16G 離 心機(上海安亭科學儀器廠); UV-1800D 紫外分光光度計 (上海美譜達儀器有限公司); HH-6 數顯恒溫水浴鍋(國華電 器有限公司)。

2.2 實驗方法

2.2.1 試樣處理

準確稱取試樣 1 g(精確至 0.01 g)或吸取試樣 1.0 mL, 置于 15 mL 離心管中, 加水至 10 mL, 渦旋提取 1 min, 靜 置 5 min, 取上清液作為提取液(如上清液渾濁, 加入 1 mL 106 g/L 亞鐵氰化鉀溶液和 1 mL 220 g/L 乙酸鋅溶液, 渦旋 混勻, 4000 r/min 離心 5 min 或濾紙過濾, 取上清液或濾液 作為提取液)。

2.2.2 測定比色卡法

準確移取提取液 2 mL 于 5mL 離心管中, 加入 0.4 mL 100 g/L 乙二胺四乙酸二鈉溶液和 0.4 mL 5 g/L AHMT 溶液, 渦旋混勻后靜置 10 min, 再加入 0.1 mL 15 g/L 高碘酸鉀溶液, 渦旋混勻后靜置 5 min, 立即與標準色階卡 目視比色, 10 min 內判讀結果。進行平行試驗, 2 次測定結 果應一致, 即顯色結果無肉眼可辨識差異。 AHMT 分光光度法: 前處理同上, 以零管調節零點, 于波長 550 nm 處測定吸光度。 乙酰丙酮分光光度法: 準確移取提取液 2 mL 置于 5 mL 離心管中。于試樣管中分別加入 0.2 mL 乙酰丙酮溶液, 渦 旋混勻后沸水浴 5 min, 取出冷卻至室溫后以零管調節零 點, 于波長 413 nm 處測定吸光度。

2.2.3 標準曲線的建立

用甲醛標準溶液配制成相當于 0、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0 µg 甲醛含量的標準系列, 同樣品按照 AHMT 和 乙酰丙酮的分光光度法的測定步驟檢測, 以甲醛含量為橫 坐標, 吸光值為縱坐標繪制標準曲線。在線性范圍內, 相 關系數 r 2 在 0.9990~0.9999。

2.2.4 標準比色卡的制備

將甲醛標準溶液配制成 0、0.5、1、2、5、10、20 mg/L 濃度的甲醛標準系列工作液, 同樣品按照 AHMT 比色卡法 測定, 得到濃度系列為 0、5、10、20、50、100、200(mg/kg或 mg/L)甲醛標準比色卡, 見圖 1

2.2.5 產品方法性能指標的測定

以銀魚、牛肚和竹筍為代表的空白基質樣品, 添加甲 醛標準溶液, 分別制成 0 mg/kg(空白)、5 mg/kg[檢測限 (limit of detection, LOD)]、10 mg/kg(2 倍 LOD)、20 mg/kg (4 倍 LOD)4 個添加水平的樣本的樣本各 50 份, 按前處理 方法和檢測步驟進行測定。

2.2.6 交叉反應

以銀魚為代表的空白基質樣品, 分別加入乙醛、丙 醛、丁醛、苯甲醛、水楊醛、甲醇、乙醇等標準溶液, 制 備成添加水平為 0、5、10、20、30、40、50、100、200 mg/kg 的系列樣品, 按優化后的前處理方法和檢測步驟進行測定, 考察試劑盒與上述化合物的交叉反應。交叉反應率 (cross-reactivity, CR%)的計算見式(1): CR%=(甲醛最低檢出限/其他物質最低檢出限)×100% (1)

3 結果與分析

在水發產品中, 甲醛以游離態和結合態 2 種形式存 在, 考慮到結合態甲醛要加入磷酸或硫酸加熱分解、蒸 餾才能進行測定, 不符合快檢的要求, 因此, 樣品前處理 方法的研究主要針對游離態甲醛。加入蛋白沉淀劑(220 g/L 的乙酸鋅溶液+106 g/L 的亞 鐵氰化鉀溶液)可能會對甲醛進行吸附和對 AHMT 方法的 顯色產生影響, 因此對加入蛋白沉淀劑進行實驗。稱取 1 g 銀魚 10 份于 20 個離心管中, 各加濃度為 50 μg/mL 的甲醛 標準品溶液 2 mL, 將 20個離心管分成 2 組, 每組 10個, 一 組加入水 6 mL, 再加入 1 mL 試劑乙酸鋅溶液和 1 mL 亞鐵 氰化鉀溶液; 另一組加入 8 mL 水。之后 2 組同時經渦旋提 取和離心后, 取上清液 2 mL 按 AHMT 分光光度法和乙酰 丙酮分光光度法測定吸光度, 比較吸光度的變化。結果表 明加入蛋白沉淀劑吸光值變化不大, 不會對甲醛進行吸附 和顯色產生影響。乙酰丙酮法: 準確移取 2 mL 10 μg/mL 甲醛標準溶液 于 5 mL 離心管中, 加入 0.2 mL 乙酰丙酮溶液, 渦旋混勻 后, 沸水浴中反應一定時間, 取出冷卻至室溫, 將顯示溶 液置于 1 cm 比色皿中, 以空白液為參比調零, 于 413 nm 測定吸光度值。沸水浴時間和吸光度值變化見圖 6。當沸 水浴時間為 5 min 時, 顏色反應達到最深, 之后不再增大, 因此, 選取 5 min 作為沸水浴時間。

4 結 論

甲醛是水果、蔬菜、畜禽肉、魚、甲殼類動物等食品 中天然存在的成分。大多數食品中天然存在的甲醛含量較 低, 不會對健康造成危害, 但是人為添加、用甲醛溶液浸 泡食品、容器污染等途徑引入到食品中的甲醛的含量一般 會較高, 會危害消費者健康。因此, 本方法適用于水發 產品中甲醛的快速測定, 但并不能區分水發產品中甲醛 的來源, 所以判斷水發產品中甲醛是否超標, 應該根據 相應的國家限量標準或方法。海水類水產品在冷凍儲存 過程中, 其肌肉中的氧化三甲胺容易在酶的作用下分解 成二甲胺和甲醛, 因此甲醛作為代謝中間產物普遍 存在。雖然國家明令禁止在食物中人為添加甲醛, 但判 定一種食品中是否人為添加非食品原料甲醛, 應當扣 除食品原料中的原生質本底量。由于不同種類水產品 中甲醛含量差異較大, 建議對常見的不同區域、不同品 種、不同季節的水產品中甲醛的本底做系統分析, 根據實 際情況進行判定。



 

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