糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖 尿病致死率最高的微血管并發(fā)癥，也是導致終末期 腎病的主要原因。DN 的主要病理特征為腎小球基 底膜增厚、細胞外基質和系膜擴張、腎小球硬化伴 有不同程度的腎間質和腎小管損害。DN 的發(fā)病機 制包括腎素-血管緊張素-醛固酮（RAAS）激活導致 的血流動力學異常和血流變因素、糖代謝紊亂、糖 基化終產物、各種生長因子及細胞因子、氧化應激 反應、遺傳因素等。其中，高血糖導致的氧化應 激起了關鍵作用。有研究表明，核因子紅細胞衍 生 2 相關因子/血紅素氧合酶（Nrf2/HO-1）是細胞 內抗氧化應激最重要的通路之一。

1 材料 

1.1 實驗動物 

自發(fā)型 2 型糖尿病 C57BLKS/Jdb/db 小鼠 （db/db）10 只，雄性，9 周齡，體質量（35.10±1.41） g（33～37 g），同遺傳背景的 C57BLKS/Jdb/+小鼠 （db/m）10 只，雄性，9 周齡，體質量（19.84±1.18） g（18～22 g），購自南京大學模式動物研究所，許 可證號 SCXK（蘇）2018-0008。本研究已通過南開 大學動物護理與使用委員會批準。 

1.2 藥物與試劑 

五味子（天津市中藥飲片廠有限公司，批號 1806038-01），經天津市醫(yī)藥科學研究所賈淑杰主任 技師鑒定為木蘭科植物五味子 Schisandra chinensis(Turcz.) Baill. 的干燥成熟果實；小鼠尿微量白蛋白 ELISA 試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）；丙 二醛（MDA）檢測試劑盒（北京碧云天生物科技有 限公司）；過碘酸雪夫（PAS）染色試劑盒（北京索 萊寶科技有限公司）；反轉錄試劑盒、PCR 試劑盒 （北京全式金生物技術有限公司）；PCR 引物（北京 六合華大基因科技有限公司）；兔抗 Nrf2 多克隆抗 體、兔抗 HO-1 多克隆抗體、兔抗 β-actin 單克隆抗 體、辣根過氧化物酶標記山羊抗兔 IgG 二抗（北京 中杉金橋生物技術有限公司）；自行配制 TBST 緩沖 液、5%牛奶封閉液、1×RIPA 蛋白裂解液、5×SDS、 1×Running、1×Transfer。 

1.3 主要儀器 

血糖儀、血糖試紙（羅氏血糖健康醫(yī)護公司）； 臺式高速低溫離心機、酶標儀（美國 Thermo Fisher Scientific 公司）；SCIENTZ-48 高通量組織研磨器 （寧波新芝生物科技股份有限公司）；超微量分光光 度計（上海析譜儀器有限公司）；PCR 儀、瓊脂糖 凝膠電泳及成像系統(tǒng)、SDS-PAGE 電泳儀與轉膜系 統(tǒng)（美國 Bio-Rad 公司）；電熱恒溫金屬?。ê贾輮W 盛儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（天津化工有限公 司）；脫色搖床（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；石蠟切片機（德國 Leica 公司）；CX31 正置顯 微鏡（日本 Olympus 公司）。

2 方法 

2.1 動物分組 

10 只 C57BLKS/Jdb/db 小鼠和 10 只 db/m 小鼠 在溫度（22±2）℃，相對濕度（60±10）%，保持 12 h 光照/12 h 黑暗交替的動物房中進行飼養(yǎng)，并保 證相同自由飲水和常規(guī)飼料喂養(yǎng)，每 2 天更換 1 次 墊料。順應性喂養(yǎng) 1 周后，稱體質量并測血糖， C57BLKS/Jdb/+小鼠隨機分為對照組和 SE 對照組， C57BLKS/Jdb/db 小鼠隨機分為模型組和 SE 治療 組，每組 5 只。 

2.2 藥物制備 

按照 Zhang 等的方法和步驟，用乙醇循環(huán)萃 取法制備 SE，五味子 100 g 用 95%乙醇每次加熱回流 3 h，共提取 2 次，合并 2 次提取液，靜置濾過， 減壓回收乙醇濃縮成浸膏，4 ℃保存，實驗時稀釋 最終得到含生藥 1 mg/mL 的 SE（經高效液相色譜 分析，SE 中五味子甲素和五味子乙素的質量分數(shù)分 別為 1.38%和 1.46%）。 

2.3 給藥方法 

小鼠 10 周齡時開始 ig 給藥，SE 對照組與 SE 治療組給予5 mg/kg的SE（給藥前將SE放至室溫， 混勻后備用），對照組與模型組 ig 等量雙蒸水，每 天 1 次，連續(xù)給藥 6 周。

3 結果 

3.1 各組小鼠體質量、血糖、24 h 尿微量白蛋白測 

定結果 結果如圖 1 所示，在實驗 0 周時，與對照組相 比，模型組小鼠體質量、血糖和 24 h 尿微量白蛋白 均顯著增高（P＜0.01）；SE 對照組與對照組比較， 體質量、血糖和24 h尿微量白蛋白水平差異不顯著； 在 3、6 周時，SE 治療組的血糖和 24 h 尿微量白蛋 白水平明顯低于模型組（P＜0.05、0.01），但 SE 治 療組與模型組比較，小鼠體質量無明顯變化；對照 組與 SE 對照組小鼠體質量亦無明顯差異。

3.2 氧化應激指標 

結果如圖 2 所示，與對照組相比，模型組的 MDA 顯著升高（P＜0.01）；SE 對照組 MDA 水平 與對照組比較差異不顯著；與模型組相比，SE 治療 組的 MDA 水平顯著降低（P＜0.01）。

4 討論 

DN 是在糖尿病病程中出現(xiàn)的以蛋白尿、高血 壓、水腫、腎功能不全等腎臟病變?yōu)樘卣鞯募膊?，其早期臨床表現(xiàn)為腎小球高濾過率，尿微量白蛋白 排泄率正常，隨著病情進展，出現(xiàn)微量白蛋白尿、 甚至大量蛋白尿、腎小球濾過率下降，最終導致腎 功能不可逆損害，形成終末期腎病。

免責聲明：文章僅供學習和交流，如涉及作品版權問題需要我方刪除，請聯(lián)系我們，我們會在第一時間進行處理。