鹽酸特拉唑嗪( terazosin) 片為第二代選擇性 α1-腎上腺素受體阻滯劑，由美國(guó)雅培公司開發(fā)成 功，1985 年在德國(guó)首次上市，1987 年 8 月 7 日獲 FDA 批準(zhǔn)后，已在美國(guó)、歐洲及日本等國(guó)已廣泛用 于臨床，商品名高特靈，用于治療高血壓和良性前列 腺增生。

1 材料與方法

1. 1 藥品與試劑

受試藥品: 鹽酸特拉唑嗪片［規(guī)格: 2 mg( 按二水合特拉唑嗪計(jì)) ，批號(hào): 070301，貴州威門藥業(yè)股 份有限公司］。參比藥品: 高特靈［鹽酸特拉唑嗪 片，規(guī)格: 2 mg( 按特拉唑嗪計(jì)) ，批號(hào): 36582VA，英 國(guó)雅培制藥有限公司］。鹽酸特拉唑嗪對(duì)照品( 中 國(guó)藥品生物制品檢定所，純度 99. 3% ) 。內(nèi)標(biāo)甲磺 酸多 沙 唑 嗪 對(duì) 照 品 ( 浙江省藥品檢驗(yàn)所，批 號(hào) 20040701，純度: 99. 1% ) 。甲醇、乙腈為色譜純; 甲 酸銨、甲酸為分析純; 雙蒸水( 新鮮 Milli-Q 超純水) 。 空白血漿( 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院輸血科) 。

1. 2 儀器

Agilent ＲＲLC1200 高效液相系統(tǒng)，6410 Triple Quad LC-MS /MS 三重四極桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧離 子 源 ( ESI ) 以 及 Agilent Mass Hunter 工 作 站 B. 01. 00( 美國(guó) Agilent 公司) 。 液質(zhì)系統(tǒng): Agilent ＲＲLC1200，6410 Triple Quad LC-MS /MS 三重四極桿質(zhì)譜儀( 美國(guó) Agilent 公司) ; QL － 901 旋渦振蕩儀( 其林貝爾儀器制造公司) ; JAC ultrasonic 4020 超聲儀( 上海君翼儀器設(shè)備有限公司) ， Adventurer AＲ1140 電子天平( 美國(guó) OHAUS 公司) ，Eppendorf 5417c 離心機(jī)( 德國(guó) EPPＲNDOＲF 公司) 。

1. 3 色譜與質(zhì)譜條件

色譜柱: ZOＲBAX SB-C18 ( 3. 0 mm × 150 mm，3. 5 μm) ; 流動(dòng)相: 甲醇-10 mmol·L － 1甲酸銨水溶液( 78∶ 22，V/V) 用甲酸調(diào) pH 值至 4. 14; 流 速: 0. 34 mL· min － 1 ; 柱溫: 20 ℃; 采用大氣壓電噴霧離子源( ESI) ，多 重反應(yīng)選擇離子監(jiān)測(cè)( MＲM) ，正離子模式; 離子源霧化 氣溫度: 350 ℃; 霧化氣壓力: 310. 28 kPa; 反吹氣流量 9 L·min － 1 ; 毛細(xì)管電壓4 000 V; fragment 為120 V，EMV 為300 V; 特拉唑嗪及內(nèi)標(biāo)碎片電壓分別為 30、30 V; 進(jìn) 樣量 10 μL; 特拉唑嗪母離子及子離子為 m/ z 388. 2/ 290. 1; 內(nèi)標(biāo)多沙唑嗪母離子及子離子為 m/ z 452. 0/ 344. 1。

1. 4 研究對(duì)象

試驗(yàn)方案經(jīng)浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院倫理委 員會(huì)批準(zhǔn)。18 例健康男性受試者，平均年齡為( 22. 80 ± 1. 70) 歲，平均體重為( 61. 30 ± 6. 07) kg，平均身高 ( 169. 95 ± 4. 28) cm; 無(wú)心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi) 分泌系統(tǒng)及骨骼肌肉等病史; 經(jīng)一般體格檢查、血、尿 常規(guī)化驗(yàn)、血清學(xué)功能檢查，均屬正常; 心、肺、腹部叩、 觸診、聽診無(wú)異常發(fā)現(xiàn)，淺表淋巴結(jié)無(wú)腫大，甲狀腺無(wú) 腫大，并且無(wú)其他陽(yáng)性體征發(fā)現(xiàn); 十二導(dǎo)聯(lián)心電圖等檢 查項(xiàng)目結(jié)果正常; 受試者均自愿簽署知情同意書。

1. 5 給藥方案與血樣采集

本試驗(yàn)按隨機(jī)、開放、雙周期自身交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。18 例男性健康受試者隨機(jī)分為2 組，一組受試者先給 予參比制劑，另一組給予受試制劑，經(jīng)中間清洗期( 1 周) 后進(jìn)行交叉給藥。服藥前禁食 10 h 以上，次日晨 空腹服用受試制劑或參比制劑，溫開水 250 mL 送服。 服藥后 2 h 內(nèi)不飲水，給藥后 4 h 給予統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)餐。 18 例受試者均完成全部試驗(yàn)。受試制劑和參比制劑 的劑量均為 2 mg。于服藥前和服藥后 0. 25、0. 5、 0. 75、1、1. 5、2、3、4、6、8、12、24、36、48 h 分別從上肢靜 脈取血4 mL，置于肝素抗凝試管中，以 4 000 r·min － 1 離心15 min，分離血漿，置于 － 70 ℃冰箱中凍存。

2 結(jié) 果

本實(shí)驗(yàn)考察了來(lái)源于 6 個(gè)不同個(gè) 體的空白生物樣品。空白血漿、空白血漿加內(nèi)標(biāo)、空 白血漿加特拉唑嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液及受試者服藥后 2 h 血 漿樣品的典型色譜見圖 1。由圖 1 可見，特拉唑嗪 和內(nèi)標(biāo)多沙唑嗪的保留時(shí)間分別約為 2. 72 和 3. 41 min。待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)出峰處均無(wú)雜峰干擾，血漿內(nèi)源 性基質(zhì)不干擾待測(cè)物及內(nèi)標(biāo)的測(cè)定，方法具有很好 的特異性。精密量取對(duì)照品儲(chǔ) 備液適量，加甲醇分別稀釋制成每 1 mL 中含特拉唑 嗪 3、12、30、60、120、300、600、1 200 ng 的溶液，分別 精密量取 20 μL，加入空白血漿 180 μL，混旋 30 s， 配制 成 質(zhì) 量 濃 度 0. 3，1. 2，3. 0，6. 0，12. 0，30. 0， 60. 0，120. 0 ng·mL － 1的特拉唑嗪對(duì)照品血漿，精密 加入內(nèi)標(biāo)溶液 20 μL 及沉淀劑( 乙腈-甲醇-甲酸 = 4∶ 1∶ 0. 1) 500 μL，混旋 1 min，13 000 r·min － 1，離心 5 min，取上清液進(jìn)樣 10 μL。以特拉唑嗪子離子 ( m / z 290. 1) 質(zhì)譜峰面積與內(nèi)標(biāo)子離子( m / z 344. 1)質(zhì)譜峰面積的比值( Y) 對(duì)樣品濃度( ρ) 進(jìn)行線性回 歸，得工作方程。在 0. 3 ～ 120. 0 ng·mL － 1內(nèi)，采用 加權(quán)( 1 /ρ 2 ) 最小二乘法進(jìn)行線性回歸，其標(biāo)準(zhǔn)曲線 回歸方程為: Y = 0. 374 6ρ + 0. 007 5，r 2 = 0. 997 7，定 量下限為 0. 3 ng·mL － 1。

3 討 論

本試驗(yàn)建立了測(cè)定人血漿中特拉唑嗪的 LCMS /MS 方 法，用 沉 淀 劑 ( 乙 腈-甲 醇-甲 酸 = 4 ∶ 1 ∶ 0. 1) 沉淀蛋白、甲磺酸多沙唑嗪為內(nèi)標(biāo)，方法靈敏 度高，準(zhǔn)確度和精密度符合要求，適用于鹽酸特拉唑 嗪片的藥動(dòng)學(xué)和生物利用度研究。 本試 驗(yàn) 所 得 的 主 要 藥 動(dòng) 學(xué) 參 數(shù) 與報(bào)道基本一致。18 例健康受試者按自身前 后交叉分別口服鹽酸特拉唑嗪片受試制劑和參比制 劑 2 mg 后，兩制劑特拉唑嗪主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù) ρmax、 AUC0-t及 AUC0-∞ 經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行多因素方差分析 ( ANOVA) ，兩制劑在給藥周期及制劑間均無(wú)顯著性 差異( P ＞ 0. 05) ; 在 α = 0. 05 水平上行雙單側(cè) t 檢 驗(yàn)，受試制劑與參比制劑中 ρmax 和 AUC0-t 的幾何均 數(shù)比的 90% 置信區(qū)間均落在 80. 00% ～ 125. 00% 內(nèi)，可認(rèn)為受試制劑和參比制劑在空腹?fàn)顟B(tài)下具有 生物等效性，臨床上可替換使用。 試驗(yàn)過程中，發(fā)生了頭暈、暈厥、小便失禁等不 良事件。可能是由于藥物引起的體位性低血壓，亦 可能與受試者緊張，清晨空腹有關(guān)。在服藥開始后 研究者密切觀察，并囑咐受試者起臥緩慢。試驗(yàn)期 間未發(fā)生嚴(yán)重不良事件，鹽酸特拉唑嗪片在健康受 試者中的安全性較好。